Pendant la Seconde Guerre mondiale, la plupart des militaires ont été formés aux premiers secours par l'Ambulance Saint-Jean. L'Ambulance Saint-Jean a également formé des comités de protection contre les raids aériens, qui veillaient notamment à ce que le public soit formé aux procédures d'urgence telles que l'utilisation de masques à gaz. Pendant la guerre, 221 Canadiennes sont parties outre-mer dans le cadre des détachements d'aide volontaire pour servir dans les hôpitaux du monde entier, dans les camps de prisonniers de guerre et même dans les camps de concentration libérés. Beaucoup d'autres ont servi dans des hôpitaux civils et militaires au Canada. De nombreuses femmes, membres de l'Ambulance Saint-Jean, ont pris part à une unité de défense civile appelée Corps d’Ambulance Féminin (CAF), qui a servi dans toute la Colombie-Britannique. Elles ont été formées pour devenir infirmières, pompiers et brancardiers, et sont restées en service actif jusqu'à la fin de la Seconde Guerre mondiale.
En 1946, la Commanderie du Canada devient le Prieuré du Canada de l'Ordre. L'Ambulance Saint-Jean s'intéresse depuis longtemps à la sécurité sur le lieu de travail. Dans les années 1960 et 1970, l'Ambulance Saint-Jean de l'Alberta a exercé des pressions en faveur de l'adoption de normes réglementaires en matière de premiers soins, et a également conseillé le gouvernement sur les modifications à apporter au règlement sur les premiers soins tout au long des années 1990.
L'Ambulance Saint-Jean est intervenue lors d'un certain nombre de catastrophes naturelles ou causées par l'homme. Il s'agit notamment de l'explosion d'Halifax (1917), de la grippe espagnole (1918-19), des incendies des navires jumeaux SS Harmonic et SS Noronic sur les Grands Lacs (1945 et 1949), de l'ouragan Hazel (1954), de l'écrasement du vol 621 d'Air Canada (1970), du déraillement du train de Mississauga (1979), de la tempête de verglas de 1998, de l'épidémie de SRAS (2003), des incendies de forêt en Colombie-Britannique (2017 à aujourd'hui), des inondations en Colombie-Britannique (2021) et de la récente pandémie de la COVID-19.
En 1974, l'Association de l'Ambulance Saint-Jean et la Brigade de l'Ambulance Saint-Jean ont fusionné en une seule organisation. Aujourd'hui, la brigade est devenue les premiers intervenants médicaux de l'Ambulance Saint-Jean, qui assurent une couverture médicale lors d'événements publics et en cas d'urgence. Ce sont les bénévoles de l'Ambulance Saint-Jean avec lesquels le public aura le plus d'interaction. Les divisions de la patrouille de ski sont également présentes au Québec et ont vu le jour en 1928. Les divisions d'intervention sur les campus ont été ajoutées dans les années 1990, la division inaugurale ayant été créée à l'Université Queen's de Kingston, et sont maintenant présentes dans de nombreux établissements postsecondaires.
Le programme de chiens de thérapie de l'Ambulance Saint-Jean a débuté à Peterborough, en Ontario, en 1992, avec huit chiens. Le programme compte aujourd'hui 3 500 chiens et leurs maîtres dans tout le pays. Dans le cadre de ce programme, les bénévoles et les chiens se rendent dans des hôpitaux, des écoles, des résidences pour personnes âgées et d'autres endroits afin d'apporter un soutien émotionnel aux personnes qui peuvent en bénéficier.
Les premières divisions de cadets ont été créées pour les jeunes en 1933. Les cadets permettent aux jeunes de 6 à 17 ans d'acquérir des compétences en secourisme et de faire du bénévolat dans leur collectivité. L'Ambulance Saint-Jean a récemment lancé le programme Connexion SJA pour permettre à encore plus de jeunes de s'impliquer.
L'Ambulance Saint-Jean continue d'être l'un des chefs de file au Canada en matière de formation aux premiers soins. En plus du cours de secourisme standard, d'autres cours sont maintenant offerts au public, notamment le secourisme en milieu sauvage et le secourisme pour les animaux de compagnie.
L'Ordre de Saint-Jean est l'une des cinq distinctions nationales du régime canadien des distinctions honorifiques, dont l'Ordre du Canada. L'Ordre de Saint-Jean est un ordre humanitaire qui a été reconnu comme ordre national dans le régime canadien des distinctions honorifiques en 1990. Approuvés par le gouverneur général du Canada, les membres de l'Ambulance Saint-Jean qui sont nommés ou promus, reçoivent l'Ordre de Saint-Jean. Ils apparaissent dans la Gazette du Canada, le journal officiel du gouvernement du Canada depuis 1841. En tant que l'un des ordres reconnus dans le régime canadien des distinctions honorifiques, l'insigne de l'Ordre peut être porté avec d'autres décorations, médailles et insignes qui ont également été accordés ou autorisés par le Souverain, le Roi du Canada.
Tout au long de notre histoire, les bénévoles de l'Ambulance Saint-Jean ont été prêts à servir là où le besoin s'en faisait sentir, qu'il s'agisse de guerres mondiales ou de pandémies mondiales, et de tout ce qui se trouve entre les deux. Les bénévoles de l'Ambulance Saint-Jean ont pu mettre à profit leurs compétences en matière de sauvetage dans tout le pays afin d'aider les personnes de tous les horizons, dans l'esprit des deux devises de l'Ordre : Pro Fide (pour la foi) et Pro Utilitate Hominum (au service de l'humanité).